表达牛呼吸道合胞体病毒G蛋白基因的重组Ⅰ型牛疱疹病毒的构建与鉴定

作者：冯军科; 朱远茂; 任宪刚; 祖立闯; 李娇; 史鸿飞; 高欲燃; 童光志; 薛飞

来源：中国预防兽医学报, 2010, (02): 81-85.

• 牛呼吸道合胞体病毒
• G蛋白基因
• 牛疱疹病毒Ⅰ型
• 磷酸钙-DNA沉淀法 bovine respiratory syncytial virus (BRSV)
• G protein gene
• bovine hepervirus-1
• calcium phosphate-mediated transfection

为构建表达牛呼吸道合胞体病毒(BRSV)G蛋白基因的牛疱疹病毒Ⅰ型(BHV-1)重组病毒,本研究将人工合成的BRSV全长G蛋白基因编码序列插入到巨细胞病毒(CMV)启动子之下构建TK基因缺失转移载体。利用磷酸钙-DNA沉淀法将该转移载体与亲本病毒BHV-1/TK-/LacZ+的基因组DNA共转染牛鼻甲细胞后收获增殖的病毒。通过反向蚀斑筛选,得到重组病毒BHV-1/TK-/G+。PCR检测结果证实G蛋白基因已经插入到了亲本病毒BHV-1/TK-/LacZ+的基因组中,间接免疫荧光试验和western blot证实BHV-1/TK-/G+中的G蛋白基因在感染的细胞中获得了表达。本研究为研制BRSV...

• 单位
  中国农业科学院哈尔滨兽医研究所; 兽医生物技术国家重点实验室