微流控电融合芯片的研制及其在体细胞重编程中的应用

作者：吴畏; 徐海伟; 屈娅; 张小玲; 胡宁; 阴正勤

来源：第三军医大学学报, 2013, 35(01): 29-33.

DOI：10.16016/j.1000-5404.2013.01.008

• 电融合
• 体细胞重编程
• 微流控芯片
• 胚胎干细胞

目的开发高通量的细胞电融合平台,并通过此平台将小鼠胚胎干细胞(mouse embryonic stem cells,mESCs)与体细胞融合,探讨融合细胞的多能性。方法本实验室自主研发微流控芯片,将转染了绿色荧光的mESCs与转染了红色荧光的NIH3T3细胞进行电融合,并计算其排队率与融合率。通过流式细胞仪筛选出表达两种荧光的融合细胞,观察融合细胞的表型。RT-PCR检测NIH3T3、mESC以及融合细胞的多能性基因(Nanog、OCT4、SOX2和LIN28)mRNA的表达水平。结果自主研发了微流控芯片,构建了高通量的细胞电融合平台,通过此平台将mESCs与NIH3T3进行电融合,其排队率为(44.35±10.99)%,融合率为(59.88±20.03)%,融合细胞可形成类似于ESC样的克隆。RT-PCR法结果显示mESC和融合细胞均表达多能性基因Nanog、OCT4、SOX2和LIN28 mRNA,而NIH3T3不表达。结论通过自主研发的微流控芯片,可实现mESCs与NIH3T3的高效融合,使体细胞重编程为多能性干细胞。

• 单位
  重庆大学; 第三军医大学西南医院; 生物工程学院