miR-186-5p通过下调MYCN轴增强小儿神经母细胞瘤NB1/DDP细胞顺铂敏感性的机制研究

作者：王荣; 张旭铭; 敬晓莉; 成彩虹

来源：沈阳药科大学学报, 2022, 39(12): 1478-1485.

DOI：10.14066/j.cnki.cn21-1349/r.2020.1167

• miR-186-5p
• MYCN
• 小儿神经母细胞瘤
• 顺铂
• NB1/DDP

目的 探讨miR-186-5p对小儿神经母细胞瘤NB1/DDP细胞顺铂敏感性的影响。方法 构建小儿神经母细胞瘤细胞顺铂耐药株NB1/DDP后，实验分组为：NC组(未加入DDP的NB1顺铂敏感细胞)、Resistance组(加入0.5 mol·L-1 DDP处理的NB1/DDP耐药细胞)、miR-186-5p mimic组(在0.5 mol·L-1 DDP处理的NB1/DDP耐药细胞中转染miR-186-5p mimic)、miR-186-5p inhibitor组(在0.5 mol·L-1 DDP处理的NB1/DDP耐药细胞中转染miR-186-5p inhibitor)、pcDNA3.1-MYCN组(在0.5 mol·L-1 DDP处理的NB1/DDP耐药细胞中转染pcDNA3.1-MYCN)、sh-MYCN组(在0.5 mol·L-1 DDP处理的NB1/DDP耐药细胞中转染sh-MYCN)和miR-186-5p mimic+pcDNA3.1-MYCN组(在0.5 mol·L-1 DDP处理的NB1/DDP耐药细胞中转染miR-186-5p mimic和pcDNA3.1-MYCN);应用RT-qPCR检测miR-186-5p的表达水平；双荧光素酶报告基因验证miR-186-5p和MYCN的靶向关系；Western blot检测MYCN的表达水平；采用MTT试剂盒和Transwell法分别检测NB1/DDP细胞增殖活力和侵袭，流式细胞术检测细胞凋亡。结果 过表达miR-186-5p显著抑制NB1/DDP细胞增殖和侵袭(P<0.05)并增强NB1/DDP细胞对顺铂的敏感性，而抑制miR-186-5p则相反；miR-186-5p靶向负调控MYCN的表达水平；过表达MYCN逆转了miR-186-5p对NB1/DDP细胞增殖和侵袭的抑制作用(P<0.05)。结论 miR-186-5p通过下调MYCN的表达水平增强NB1/DDP细胞对顺铂的敏感性。

• 单位
  达州市中西医结合医院; 达州职业技术学院