IFN-β启动子分泌性荧光素酶稳定表达细胞系的构建及鉴定

作者：王飒; 屈阳; 孟春春; 仇旭升; 廖瑛; 谭磊; 宋翠萍; 刘炜玮; 孙英杰^*; 丁铲^*

来源：中国动物传染病学报, 2022, 30(04): 31-38.

DOI：10.19958/j.cnki.cn31-2031/s.2022.04.010

• 干扰素β
• 启动子
• 报告基因
• 分泌性荧光素酶

先天性免疫是细胞抵御病毒感染的第一道防线，I型干扰素(IFN)在抗病毒先天性免疫中发挥关键作用。干扰素β(IFN-β)作为I型IFN成员，是IFN通路激活的效应蛋白和指征蛋白，IFN-β启动子活性则是通路是否激活的重要指标。Gaussia luciferase(Gluc)是近年来发现的荧光素酶家族中最小的成员，呈分泌性表达，与常规荧光素酶相比具有诸多优势。为了建立一种新型、简易、稳定的IFN-β启动子活性检测方法，本研究首先将人IFN-β基因启动子以及下游Gluc克隆至慢病毒载体中，将其包装成慢病毒后感染A549细胞；使用杀稻瘟菌素筛选及有限稀释法稀释培养得到单克隆细胞，经PCR初步筛选得到稳定表达IFN-β-Gluc的A549细胞株，新城疫病毒和poly(I:C)处理单克隆细胞，筛选得到能够高水平诱导Gluc的阳性细胞株。进一步通过正向诱导(转染IFN-β信号通路相关蛋白质粒)和反向抑制实验(转染新城疫病毒V蛋白质粒)证实，并从基因及酶活性水平验证其表达IFN-β-Gluc的稳定性。该细胞系提供了检测IFN通路激活的简易方法，为进一步研究病毒诱导IFN-β的转录、调控，动态监测IFN-β启动子活性，高通量筛选等研究奠定了基础。

• 单位
  西北农林科技大学; 动物科学学院; 中国农业科学院上海兽医研究所; 福建农林大学