干扰素刺激基因鸟苷酸结合蛋白2(GBP2)质粒的构建及其抗汉滩病毒感染的作用

作者：屈思瑞; 王芳; 张俊梅; 应旗康; 赵瑞华; 古天乐^*; 吴兴安^*

来源：细胞与分子免疫学杂志, 2023, 39(10): 917-923.

DOI：10.13423/j.cnki.cjcmi.009655

• 鸟苷酸结合蛋白2(GBP2)
• 汉滩病毒(HTNV)
• 抗病毒
• IFN

目的 构建pCMV-GBP2-3tag6真核表达质粒，研究鸟苷酸结合蛋白2(GBP2)在汉滩病毒(HTNV)感染过程中的作用。方法 利用一步定向克隆(In-fusion)方法构建pCMV-GBP2-3tag6质粒，并用双酶切和测序方法进行鉴定。将构建成功的pCMV-GBP2-3tag6质粒转染A549细胞，CCK-8法检测细胞增殖能力，流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡。A549细胞转染GBP2质粒24 h后感染HTNV。实时定量PCR检测HTNV S、 β干扰素(IFN-β)、黏病毒抗性蛋白1(MX1)、干扰素诱导蛋白四肽重复序列1(IFIT1)、 CXC趋化因子配体10(CXCL10)基因mRNA表达水平，Western blot法检测GBP2和HTNV核衣壳蛋白(NP)表达，病灶形成实验检测细胞上清中HTNV滴度。结果 成功构建pCMV-GBP2-3tag6真核表达质粒，并在A549细胞中成功表达GBP2蛋白；过表达GBP2对细胞增殖、细胞周期和细胞凋亡无影响，但是可以显著降低细胞中HTNV S基因mRNA水平和NP蛋白含量以及细胞上清中HTNV滴度，调控HTNV感染后IFN通路相关基因的表达。结论 GBP2可能通过调控IFN的反应抑制HTNV感染。

• 单位
  中国人民解放军空军军医大学; 基础医学院; 延安大学; 生命科学学院