浮萍棘尾虫Adss基因克隆及表达载体构建

作者：王影; 范金凤; 张晴; 陈瑛^*

来源：水生生物学报, 2022, 46(05): 754-760.

DOI：10.7541/2022.2021.0204

• 腺苷酸基琥珀酸合成酶
• 基因克隆
• 表达载体构建
• 亚细胞定位
• 浮萍棘尾虫

为研究腺苷酸基琥珀酸合成酶(Adenylosuccinate synthase,简称Adss)在原生动物中的作用,对浮萍棘尾虫(Stylonychia lemnae)腺苷酸基琥珀酸合成酶Adss基因进行PCR克隆,获得全长为1396 bp左右的序列,其编码458个氨基酸,保守结构域含有一个P-loop NTPase结构域,蛋白结构预测Adss蛋白是由α-螺旋、β-折叠和无规卷曲组成的复杂结构。多重序列比对和系统进化分析显示浮萍棘尾虫Adss蛋白与第四双小核草履虫、多子小瓜虫和嗜热四膜虫等纤毛虫同源性较高。通过克隆浮萍棘尾虫Adss基因的启动子序列,并采用增强型绿色荧光蛋白EGFP作为报告基因,构建了启动子序列调控的表达载体pEGFP-N1-Adss,通过转染细胞确定浮萍棘尾虫Adss蛋白定位于细胞质中。文章报道了原生动物纤毛虫Adss基因,证实浮萍棘尾虫Adss蛋白属于典型的真核生物Adss,为进一步揭示Adss在单细胞真核生物中的作用机制提供了新的参考。

• 单位
  哈尔滨工业大学（深圳）; 哈尔滨师范大学