禽腺病毒血清4型fiber-2和penton 蛋白亚单位疫苗初步研究及免疫效果评价

作者：刘世佳; 尚宵敏; 王浩; 周睿; 李博硕; 孙晰瑶; 韩静静; 杜恩岐^*

来源：中国兽医学报, 2023, 43(06): 1162-1186.

DOI：10.16303/j.cnki.1005-4545.2023.06.07

• 禽腺病毒血清4型
• fiber-2
• penton
• 亚单位疫苗
• 免疫效果评价

选取禽腺病毒血清4型(fowl adenovirus serotype 4,FAdV-4)JLJ13株的fiber-2和penton蛋白作为保护性抗原，利用SWISS-MODEL网站对fiber-2蛋白空间结构进行模拟，截取其主要功能区fiber-2-Shaft 2替代fiber-2,进行密码子优化后，将fiber-2-Shaft 2和penton蛋白基因序列克隆到pET28a(+)载体上并送至北京天一辉远生物科技有限公司进行基因合成，将合成的质粒分别命名为pET-28a-msyb-fiber-2-Shaft 2和pET-28a-msyb-penton。通过原核表达系统进行蛋白表达并使用镍柱纯化。经BCA定量后，用PBS分别将fiber-2-Shaft 2和penton蛋白质量浓度稀释至1 000,500,250 mg/L,再将相同质量浓度的fiber-2-Shaft 2和penton蛋白按1∶1体积比混合后作为抗原，配伍ISCOMs佐剂，0.2 mL/只免疫30日龄SPF鸡，即高剂量组免疫fiber-2-Shaft 2和penton蛋白各100μg、中剂量组各50μg、低剂量组各25μg。一免后14 d进行二次免疫，采集二免后7,14,21 d血清检测特异性抗体和中和抗体，并在二免后21 d攻毒。结果显示，成功表达出fiber-2-Shaft 2和penton蛋白，大小分别为69,93 kDa,镍柱纯化后可获得高纯度的蛋白；二免后14 d高中低量组的中和效价依次为1 280,640,640,攻毒后阴性对照组表现出明显的临床症状，2～3 d后死亡，疫苗组均未出现任何临床症状。结果表明，利用禽腺病毒血清4型JLJ13株fiber-2-Shaft 2和penton蛋白混合配伍ISCOMs佐剂制备的亚单位疫苗免疫保护效果明显。

• 单位
  西北农林科技大学