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摘要
目的探讨直接法固体药物敏感性试验(简称"药敏试验")检测涂阳肺结核患者痰标本的应用效果。方法收集于2010年2月至2011年7月的抗酸染色阳性的肺结核患者的痰标本,共389例,先对痰标本进行分枝杆菌固体培养和直接法药敏试验,再用固体培养阳性的菌株进行传统比例法药敏试验和对硝基苯甲酸(PNB)培养基菌种鉴别。直接法药敏的试验方法为:视痰标本性状,将1～2倍的4%NaOH加入有痰标本的前处理管内,旋紧处理管螺旋盖,计时15min,涡旋震荡30s直至痰标本液化,室温静置至15min计时结束,用无菌吸管吸取前处理后的痰标本,分别均匀接种于酸性罗氏培养基(直接法药敏试验的对照培养基)、含利福平(RFP)的酸性罗氏培养基(RFP 40.0μg/ml)、含异烟肼(INH)的酸性罗氏培养基(INH 0.2μg/ml)上,每支管接种0.1～0.15ml。36℃条件下进行孵育。每周记录细菌生长情况至第8周。在对照培养基上分枝杆菌培养阳性的前提下,分别以>1%的耐药百分比即判断为耐药和含药培养基上菌落数多于20个菌落即判定为耐药的两种耐药判定方法,计算直接法固体药敏试验的检测结果。以比例法药敏试验结果为金标准,比较直接法药敏试验的检测效果。结果剔除因污染、涂阳培阴等原因无法获得药敏试验结果的标本,最终直接法和比例法均获得RFP药敏试验结果的标本346例,均获得INH药敏试验结果的标本338例。当直接法固体药敏试验以>1%的耐药百分比为耐药检测界限时,其检测RFP耐药率为10.4%(36/346),低于比例法检测的RFP耐药率[13.9%(48/346)],差异有统计学意义(χ2=24.14,P<0.01);以比例法为标准,直接法固体药敏试验对RFP耐药检测的敏感度、特异度、一致率分别为75.0%(36/48)、82.9%(247/298)、81.8%(283/346),两种方法一致性一般(Kappa=0.43);直接法固体药敏试验检测INH的耐药率为7.1%(24/338),低于比例法检测的INH耐药率[10.9%(37/338)],差异有统计学意义(χ2=15.29,P<0.01);以比例法为标准,直接法固体药敏试验对INH耐药检测的敏感度、特异度、一致率分别为64.9%(24/37)、86.0%(259/301)、83.7%(283/338),两种方法的一致性较差(Kappa=0.39)。当直接法固体药敏试验结果以含药培养基上的菌落数多于20个为耐药检测界限时,其检测的RFP耐药率为10.4%(36/346),低于比例法,差异有统计学意义(χ2=15.87,P<0.01);以比例法为标准,直接法固体药敏试验对RFP耐药检测的敏感度、特异度、一致率分别为75.0%(36/48)、86.2%(257/298)、84.7%(293/346),两种方法一致性一般(Kappa=0.49);直接法固体药敏试验检测INH的耐药率为7.1%(24/338),低于比例法,差异有统计学意义(χ2=9.38,P<0.01);以比例法为标准,直接法固体药敏试验对INH耐药检测的敏感度、特异度、一致率分别为64.9%(24/37)、88.7%(267/301)、86.1%(291/338),两种方法一致性一般(Kappa=0.43)。结论直接法固体药敏试验与传统比例法药敏试验检测的耐药性结果差异较大,对耐药结核病的临床诊断效果不理想。
