肝片吸虫MeCatL-B融合基因的构建、表达及其间接ELISA检测方法的建立

作者：王熙凤; 孟庆玲^*; 乔军; 张凯; 张国武; 贡莎莎; 黄运福; 才学鹏

来源：中国预防兽医学报, 2019, 41(03): 273-278.

• 肝片吸虫
• MeCatL-B融合基因
• 原核表达
• 间接ELISA

为分析组织蛋白酶的抗原性及评价其作为肝片吸虫(Fh) ELISA诊断抗原的潜力,本研究采用RT-PCR技术扩增FhCatL1D和CatB4基因的优势抗原表位集中区段,利用重叠延伸PCR技术融合CatL1D和CatB4基因片段获得约810 bp的Fh CatL-B融合基因(MeCatL-B),构建原核重组表达载体pET-MeCatL-B,并将其转化入BL21 (DE3)感受态细胞中诱导表达,经SDS-PAGE和western blot检测,结果显示表达的重组蛋白MeCatL-B (rMeCatL-B)约46 ku,可以被Fh阳性血清特异性识别。以纯化的rMeCatL-B为包被抗原,经优化各反应条件后建立检测Fh抗体的间接ELISA方法,该检测方法的特异性强、敏感性高、重复性好。利用该方法对97份绵羊临床血清样品进行检测,并与商品化FhELISA抗体试剂盒检测结果对比,结果显示二者符合率达95.88%。本研究为进一步研发Fh血清学诊断试剂盒奠定了前期基础。

• 单位
  石河子大学; 动物科技学院; 中国兽医药品监察所