微小RNA-643靶向下调细胞色素P450家族成员11B1促进小儿骨肉瘤增殖的临床分析及细胞与小鼠机制研究

作者：匡澜; 解礼伟^*; 王静

来源：中华实验外科杂志, 2020, 37(10).

• 骨肉瘤
• 微小RNA
• 细胞色素P450家族成员11B1
• 增殖
• 凋亡

目的探讨微小RNA(miR)-643调控细胞色素P450家族成员11B1(CYP11B1)对小儿骨肉瘤增殖的临床与机制研究。方法收集2017年6月至2018年3月天津市天津医院收治的18例小儿骨肉瘤患者, 年龄(12.04±2.68)岁, 男12例, 女6例, 同期收集18例性别和年龄配对的健康儿童。应用Lipofectamine 2000介导转染细胞株, 共分为五组:空载组, 正常生长组, miR-643模拟物组, miR-643抑制剂组, CYP11B1抑制剂组, 每组重复3次。实时定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)检测miR-643相对表达量, 蛋白质印迹法(Western blot)检测CYP11B1蛋白表达水平, 细胞增殖与毒性(CCK-8)法检测细胞增殖能力, 流式细胞仪检测细胞凋亡能力, 小鼠体内实验探究miR-643对肿瘤体积的影响。多组间比较采用单因素方差分析, 两两比较采用t检验。结果与健康者(0.53±0.06)比较, 骨肉瘤患者(3.24±0.81)血清miR-643表达水平显著增高(P<0.05)。在24、48、72 h时, 与空载组[吸光度(A)值0.36±0.04、0.44±0.03、0.56±0.05]和正常生长组(0.35±0.06、0.45±0.04、0.58±0.07)比较, miR-643模拟物组(0.51±0.05、0.75±0.07、0.93±0.06)MG-63细胞的增殖能力显著增强(P<0.05), miR-643抑制剂组(0.24±0.05、0.28±0.06、0.33±0.06)增殖能力明显受到抑制(P<0.05)。与空载组[(7.65±0.47)%]和正常生长组[(7.80±0.51)%]比较, miR-643模拟物组[(3.12±0.22)%]MG-63细胞的凋亡能力显著下降(P<0.05), miR-643抑制剂组[(24.32±2.25)%]凋亡能力显著增高(P<0.05)。与空载组(1.04±0.06)和正常生长组(0.98±0.05)MG-63细胞CYP11B1蛋白水平比较, miR-643模拟物组(0.41±0.04)和CYP11B1抑制剂组(0.45±0.05)均显著下降(P<0.05), miR-643抑制剂组(1.64±0.13)显著增高(P<0.05)。皮下注射稳定转染sh-miR-643的MG-63细胞小鼠的肿瘤平均体积为[(621.74±38.63) mm3], 显著低于对照组[(1104.36±57.01) mm3, t=4.017, P<0.01]。结论 miR-643可促进骨肉瘤MG-63细胞增殖并抑制其凋亡, 其机制与调控靶基因CYP11B1密切相关。

• 单位
  四川省骨科医院; 天津市天津医院