大鼠矽肺相关基因组织蛋白酶B的电子克隆与验证

作者：王朝辉; 马小兵; 侯文娜; 徐慧蓉; 朱兰; 伊雪

来源：中国工业医学杂志, 2014, 27(02): 93-161.

DOI：10.13631/j.cnki.zggyyx.2014.02.004

• 组织蛋白酶B
• 矽肺
• 差异表达基因
• 电子克隆

目的探讨差异表达基因组织蛋白酶B在大鼠矽肺模型中的作用。方法对以往经抑制消减杂交筛选得到的一条编号为ES110708的差异表达序列标签(EST)作为种子序列,通过电子克隆进行延伸,并在大鼠矽肺模型中用RT-PCR方法进行验证。结果筛选得到的大鼠矽肺差异表达EST经电子克隆延伸得到了含有完整开放读码框架(ORF)的cDNA序列,长度为1977bp,比原来的EST片段(172bp)延伸了1805 bp。其ORF预测为1020 bp,符合Kozak规则。将ORF序列进行同源性检索,其与序列号为NM022597.2的cDNA部分序列完全同源,说明所测ORF属于序列NM022597.2。该序列代表的基因是组织蛋白酶B。经RT-PCR验证,实验组大鼠肺组织Cathepsin B mRNA表达量明显上调。15 d、30 d、60 d时,其吸光度(A)值分别为对照组的4.133、6.639、4.981倍,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论电子克隆能有效延伸EST序列直至全长cDNA序列,差异表达基因组织蛋白酶B可能参与了矽肺的发生与发展。

• 单位
  华北理工大学; 基础医学院; 淄博市中心医院; 唐山市眼科医院