NF-κB介导白血病多药耐药细胞中葡萄糖神经酰胺合成酶对P-糖蛋白的调节作用

作者：张秀芬; 谢可鸣; 邹健; 李玉玲; 穆会君; 张滨; 谢平

来源：中华医学遗传学杂志, 2014, 31(01): 34-38.

DOI：10.3760/cma.j.issn.1003-9406.2014.01.008

• 葡萄糖神经酰胺合成酶
• P-糖蛋白
• 核因子κB
• 细胞外信号调节激酶1/2
• 多药耐药

目的探讨在白血病耐药细胞K562/A02中核因子κB(nuclear transcription factor-kappaB,NF-κB)是否参与葡萄糖神经酰胺合成酶(glucosylceramide synthase,GCS)对P-糖蛋白(P-glycoprotein,pgp)的调节作用,并研究在该调节作用信号通路中NF-κB与细胞外信号调节激酶(extracelluar signalregulated kinase,ERK)的相互关系。方法应用特异性的GCS小干扰RNA(GCS small interfering RNA,GCSsiRNA)抑制GCS基因后,实时荧光定量PCR方法检测靶基因抑制率以及对多药耐药蛋白1(multidrug resistance protein 1,MDR1)mRNA表达水平的影响;同时应用Western印迹检测各种蛋白的表达情况。使用NF-κB的特异性抑制剂二硫代氨基甲酸吡咯烷(pyrrolidine dithiocarbamate,PDTC)抑制NF-κB后,应用Western印迹检测P-gp的表达情况。U0126抑制P-ERK(phosphorylated-ERK)后,Western印迹检测细胞核内以及总的NF-κB p65和P-gp的表达。结果 GCSsiRNA转染48 h后,GCSmRNA的表达被抑制,抑制率为62%(51%73%),同时下调MDR1mRNA的表达,抑制率为52%(43%61%),与阴性干扰对照组比较,差异均有统计学意义(P<0.05);GCSsiRNA转染72 h后,GCSsiRNA组细胞核内NF-κB p65及P-ERK的表达水平均明显下调(P<0.05),同时对P-gp的表达亦有显著的抑制作用(P<0.05)。NF-κB的抑制剂PDTC处理K562/A02细胞后,对P-gp有明显的抑制作用(P<0.05)。p-ERK抑制剂U0126处理K562/A02细胞,除了能显著抑制P-ERK1/2的表达外(P<0.01),还可明显抑制细胞核内NF-κB p65的表达和P-gp的表达(P<0.01)。结论 NF-κB介导了白血病多药耐药细胞中GCS对P-gp的调节作用,且在这一调节作用信号通路中位于ERK下游。

• 单位
  苏州大学; 无锡市人民医院; 中心实验室