伯氏疟内质网塑形蛋白SEY1敲除质粒的构建及转染

作者：刘影; 史小雨; 王倩^*

来源：天津医科大学学报, 2019, 25(04): 324-328.

• 伯式疟原虫
• PbSEY1
• pL0034
• 疟原虫转染

目的:为了研究重要内质网塑形蛋白SEY1在疟原虫致病性方面的作用,本研究构建敲除伯氏疟原虫PbSEY1的质粒,结合疟原虫转染技术筛选PbSEY1缺失疟原虫突变体。方法:选取PbSEY1编码区中相邻的两个片段作为同源臂进行PCR扩增,并引入特定酶切位点,借助T4 DNA连接酶和In-Fusion无缝克隆的方法将其插入载体p L0034中;利用疟原虫同步化培养及电转染技术将该质粒转入疟原虫,基于基因同源重组原理在疟原虫中敲除PbSEY1并进行药物筛选。结果:(1)获得可用于基因敲除及回复实验的重组质粒pL0034-△Pb Sey1;(2)在伯式疟原虫中敲除PbSEY1。结论:利用重组质粒pL0034-△Pb Sey1和疟原虫转染技术初步获得PbSEY1缺失疟原虫突变体,为进一步研究PbSEY1在疟原虫致病性中的作用提供了必要工具。

• 单位
  天津医科大学; 基础医学院