激动型CD40单链抗体增强小鼠NK细胞抗肿瘤作用

作者：王曦; 张骜; 陈一川; 陆礼; 付蔚华

来源：中华微生物学和免疫学杂志, 2018, 38(04): 260-267.

DOI：10.3760/cma.j.issn.0254-5101.2018.04.004

• 激动型CD40单链抗体
• 树突状细胞
• 自然杀伤细胞
• T6-17细胞

目的获得高纯度的激动型抗小鼠CD40单链抗体(scFv),并体内外验证激动型抗小鼠CD40 scFv增强自然杀伤细胞(NK)杀伤肿瘤的作用。方法亲和层析技术获得高纯度的激动型抗小鼠CD40 scFv蛋白。激动型抗小鼠CD40 scFv体外激活DC细胞,ELISA法检测培养上清中IL-12表达水平,反应CD40 scFv对DC的激活能力。将激活的DC细胞与小鼠NK细胞共培养后,将NK细胞与小鼠成纤维瘤T6-17细胞共培养,用WST-8法检测激活后NK细胞对T6-17的杀伤作用。进一步构建BALB/c裸鼠的T6-17肿瘤模型,给予CD40 scFv瘤体注射,观察对肿瘤生长抑制作用。种瘤后第20天处死小鼠,ELISA检测肿瘤组织匀浆中IL-12和IFN-γ水平。流式细胞术检测肿瘤组织匀浆中浸润NK细胞数量的变化,免疫组化法检测NKG2D表达水平的变化。结果成功构建CD40 scFvpET28a重组质粒,并经基因测序验证无误。SDS-PAGE和His-tag Western blot检测证实CD40 scFv表达成功,蛋白质相对分子质量约为27×103。CD40 scFv处理的DC细胞的培养上清中IL-12水平为(555.86±40.48)pg/ml,较对照组明显升高(P<0.05)。利用各组激活后的DC细胞培养上清刺激NK细胞后,与CD40 scFv处理的DC共培养的NK细胞对T6-17细胞的杀伤能力为(72.23±3.99)%,较对照组明显升高(P<0.05)。CD40 scFv在体内对BALB/c裸鼠的T6-17肿瘤生长有明显抑制作用,肿瘤最终生长体积相较于对照组显著降低(P<0.05)。CD40 scFv组肿瘤组织匀浆中IL-12和IFN-γ水平分别为(188.801±32.718)pg/ml和(121.428±30.994)pg/ml,均较生理盐水(normal saline,NS)组显著升高(P<0.05)。CD40 scFv组肿瘤组织NKG2D表达阳性率为(8.18±2.01)%,较NS组明显升高(P<0.05)。结论激动型CD40 scFv可以通过DC细胞增强NK细胞的抗肿瘤能力。

• 单位
  天津医科大学总医院