Expi293F表达重组鲎C因子用于荧光法内毒素检测

作者：柯文锋; 李诗洁; 郑梦林; 白仲虎; 杨艳坤^*

来源：食品与发酵工业, 2023, 1-8.

DOI：10.13995/j.cnki.11-1802/ts.035264

• 内毒素检测
• 鲎C因子
• Expi293F
• 重组表达
• 脂质体转染

鲎C因子是一种对痕量内毒素高度敏感的丝氨酸蛋白酶原，在医药行业可替代鲎试剂用于内毒素检测。然而其重组表达困难，且对于环境中内毒素的控制要求极高。我们首先克隆了来源于东方鲎的全长C因子，并在N末端和C末端分别添加了Flag标签和6×His标签，同时用哺乳细胞表达载体中的分泌信号肽替换掉了原始C因子信号肽。构建好的重组质粒转染至人胚胎肾脏细胞Expi293F悬浮培养7 d后收获上清液，Western Blot检测蛋白与预测大小128 kDa一致，具有与内毒素结合以及结合后切割荧光底物的能力。该研究首次在人胚胎肾脏细胞Expi293F中成功表达出具有生物学活性的全长C因子，表达量达到19.18 mg/L，比DING在昆虫细胞SF9中的表达量提高了113%。该方法对于后续开发低成本内毒素检测试剂盒具有指导意义。

• 单位
  工业生物技术教育部重点实验室; 江南大学