摘要
目的 探讨HOX转录反义RNA(HOTAIR)在胃癌发病中的作用机制。方法 选取40例胃癌患者,其中男29例,女21例,平均年龄(51.7±10.8)岁;Ⅰ期20例,Ⅱ期10例,Ⅲ期6例,Ⅳ期4例;高分化9例,中分化12例,低分化19例。收集所有患者的癌变组织和癌旁组织,实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)法检测两种组织中长链非编码RNA(lncRNA) HOTAIR的表达水平,并对HOTAIR表达与患者临床特征的相关性进行分析;设计合成lncRNA HOTAIR小干扰RNA(siRNA),在原代SGC-7901胃癌细胞株建立沉默模型。检测原代SGC-7901胃癌细胞中lncRNA HOTAIR的表达,流式细胞周期和细胞凋亡检测研究lncRNA HOTAIR对癌细胞增殖凋亡的影响;结合蛋白质印迹法(Western blot)和RT-qPCR技术研究其分子调控机制。应用SPSS 19.0统计软件分析。根据不同的数据类型,组间差异采用χ2检验或t检验分析,相关性采用皮尔森(Pearson’s)相关试验评价。结果 癌组织中lncRNA HOTAIR的表达量为4.367±0.352,高于癌旁组织的0.984±0.782(P<0.05),癌组织中lncRNA HOTAIR与肿瘤分化程度以及肿瘤分期呈正相关(r=0.347、0.623,P<0.05)。lncRNA HOTAIR siRNA转染组与未转染组比较,G1期细胞数升高(78.64±6.91比58.34±6.13,t=3.806,P<0.05),S期细胞数降低(11.93 ±2.54比31.54±3.01,t=8.624,P<0.05),G2期细胞数量没有明显的变化(9.43±1.47比10.12±2.11,t=0.645,P>0.05)。lncRNA HOTAIR siRNA转染处理细胞48 h后,lncRNA HOTAIR siRNA转染组早期凋亡细胞[(22.69±3.21)%比(10.97±1.52)%]、晚期凋亡细胞[(30.41±3.97)%比(7.40±1.71)%]、坏死细胞[(5.53±0.74)%比(3.44±0.42)%]的比率均明显高于未转染组细胞(t=5.715、9.220、4.254,P<0.05)。转染处理后细胞中Wnt3a蛋白相对表达量明显低于未转染组水平(0.39±0.07比0.92±0.13,t=6.217,P<0.05)。结论 lncRNA HOTAIR在胃癌中表达上调,而抑制HOTAIR表达可以通过下调WntWnt3a蛋白表达阻遏Wnt/β-连环蛋白(β-catenin)信号通路的激活进而促进胃癌细胞凋亡。
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单位郑州大学; 河南省肿瘤医院