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摘要
目的探讨下调miR-92a表达对过氧化氢(H2O2)诱导H9C2心肌细胞凋亡的影响以及可能的分子机制。方法将体外培养的H9C2心肌细胞分为空白对照组(Blank)、H2O2模型组、阴性对照组(NC)、NC+H2O2组、mi R-92a inhibitor组、miR-92a inhibitor+H2O2组。Blank组不经任何特殊处理。NC组、NC+H2O2组、mi R-92a inhibitor组、miR-92a inhibitor+H2O2组细胞进行转染,q RT-PCR法验证转染效率。另H2O2模型组、NC+H2O2组、mi R-92a inhibitor+H2O2组细胞经H2O2诱导6 h,流式细胞术法检测细胞凋亡率。采用试剂盒检测活性氧(ROS)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、乳酸脱氢酶(LDH)释放量。Western blot法检测凋亡相关蛋白B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、Caspase-3和丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)-细胞外调节蛋白激酶(ERK)通路蛋白磷酸化情况。结果成功建立miR-92a inhibitor转染细胞模型。经H2O2处理6 h后,H2O2+mi R-92a inhibitor组H9C2细胞的凋亡率、ROS产生量、MDA和LDH释放量均低于H2O2模型组和H2O2+NC组,而细胞培养上清中SOD水平高于H2O2模型组和H2O2+NC组(P<0.05)。Western blot法检测,与H2O2模型组相比,H2O2+mi R-92a inhibitor组细胞Bcl-2蛋白表达量上调,Bax、Caspase-3、磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)、p-ERK蛋白表达量降低(P<0.05)。H2O2对H9C2细胞AKT和ERK蛋白表达量无影响(P>0.05)。结论下调miR-92a表达可抑制H2O2诱导的H9C2心肌细胞凋亡,其可能的作用机制与降低ROS释放量、调控Bcl-2、Bax、Caspase-3蛋白以及MAPK-ERK信号通路有关。
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