体外重组CaV1.2钙通道CT1蛋白片段制备方法的优化

作者：康泽; 邵冬雪; 彭羽; 苏敬阳; 封瑞; 孙雪菲; 郝丽英^*

来源：解剖科学进展, 2019, 25(05): 528-531.

DOI：10.16695/j.cnki.1006-2947.2019.05.009

• 钙通道
• 融合蛋白
• 包涵体
• 蛋白表达

目的通过改变多种实验条件提高CaV 1.2钙通道C末端GST融合蛋白(GST-CT1)在大肠杆菌BL21中的表达量及分离纯化产量。方法把pGEX-6p-3/CT1质粒转入大肠杆菌BL21中,筛选其中转化成功的菌株培养并用异丙基硫代半乳糖苷(Isopropylβ-D-Thiogalactoside,IPTG)在不同细菌浓度,不同诱导时间或不同温度下诱导表达GST-CT1蛋白,Glutathione-Sepharose 4B beads(GS-4B beads)纯化蛋白,聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)检测蛋白表达水平。结果当吸光度为0.6～1.0时,GST-CT1在大肠杆菌BL21中的表达量较高,IPTG诱导表达蛋白大于4h后无明显表达量差异,并且当诱导温度为25℃时,蛋白的产量将大大增加。结论可以通过控制细菌数量、控制诱导时长和降低诱导温度的方法来提高GST-CT1蛋白的产量。

• 单位
  中国医科大学