RNAi沉默RhoC基因对人脐静脉内皮细胞体外生物学行为的影响

作者：赵良平; 张庆华; 石晓燕; 韩志强; 熊国平; 黄磊; 田训

来源：中华实验外科杂志, 2012, 29(09): 1713-1715.

DOI：10.3760/cma.j.issn.1001-9030.2012.09.024

• RNA干扰
• RhoC
• 人脐静脉内皮细胞
• 细胞迁移
• 血管形成

目的观察RNA干扰(RNAi)沉默RhoC基因表达对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)生物学行为的影响。方法构建RhoC基因特异性短发夹状RNA(shRNA)真核表达载体,以脂质体介导转染HUVEC,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot法检测RNAi后细胞中RhoCmRNA及蛋白表达水平变化;划痕试验检测细胞迁移能力,噻唑蓝(MTT)比色法测定转染前后细胞增殖及黏附能力的变化。胶原基质胶三维培养检测内皮细胞体外血管生成能力。结果转染RhoCshRNA的实验组与空载体对照组比较,RhoC mRNA的表达分别为(10.93±4.72)%和(56.77±13.79)%,蛋白质的表达分别为(19.95±7.31)%和(62.06±22.75)%,细胞愈合百分比分别为(45.08±12.93)%和(73.49±10.83)%,增殖能力[吸光度(A)值]分别为1.002±0.283和1.629±0.192,血管样结构分别为2.85±1.08和4.46±1.38,而黏附能力(A值)分别为0.795±0.097和0.907±0.178。实验组较对照组迁移能力、增殖能力和血管样结构生成能力显著降低(P<0.05),转染后细胞的体外黏附能力无明显变化(P>0.05)。结论抑制RhoC表达能降低HUVEC体外增殖、迁移及血管生成能力。

• 单位
  华中科技大学; 同济医学院附属武汉中心医院; 华中科技大学同济医学院附属同济医院