桂枝茯苓丸逆转lncRNA H19介导的miR-195-5p/SGK1通路治疗子宫内膜癌机制研究

作者：张晓芳; 张宜群^*; 王珩

来源：浙江中西医结合杂志, 2021, 31(09): 810-816.

• 桂枝茯苓丸
• 子宫内膜癌
• lncRNA H19
• miR-195-5p
• SGK1
• 增殖
• 自噬

目的探究桂枝茯苓丸对子宫内膜癌Ishikawa细胞的作用和调控机制。方法进行实时定量PCR(qRT-PCR)检测lncRNA H19在人正常子宫内膜细胞EMC和子宫内膜癌细胞HEC-1A、HEC-1B、Ishikawa细胞表达。向Ishikawa细胞转染sh-H19,利用细胞计数试剂盒8(CCK8)检测细胞生长活力,流式细胞术评估细胞凋亡率,qRT-PCR和蛋白免疫印迹法(Western blot)分析自噬标志蛋白P62、Beclin1和LC3II的表达。采用双荧光素酶报告基因检测验证lncRNA H19与miR-195-5p及miR-195-5p与SGK1的靶向结合关系。将oe-H19转染到Ishikawa细胞,并将转染oeH19的Ishikawa细胞在桂枝茯苓丸含药培养液中培养。qRT-PCR检测lncRNA H19表达,CCK8、流式细胞术检测细胞的增殖和凋亡,Western blot检测自噬相关蛋白P62、Beclin1和LC3II的表达。结果与人正常子宫内膜细胞EMC (1.00±0.09)比较,lncRNA H19在子宫内膜癌细胞HEC-1A(1.73±0.13)、HEC-1B(2.12±0.14)、Ishikawa(3.18±0.16)表达显著升高(P<0.05或P<0.01)。与对照组比较,下调lncRNA H19使子宫内膜癌细胞增殖活性显著降低[(45.00±3.95)%比(100.00±8.12)%,P<0.05],细胞凋亡率明显升高[(10.06±1.12)%比(5.35±0.55)%,P<0.05]。敲减lncRNA H19的子宫内膜癌细胞P62表达显著降低,Beclin1和LC3II表达显著上调。双荧光素酶报告基因检测和Western blot结果表明,lncRNA H19靶向负调控miR-195-5p表达,miR-195-5p靶向抑制SGK1表达。在挽救实验中,与oe-NC组(1.00±0.09)比较,oe-H19组(3.23±0.29)Ishikawa细胞lncRNA H19含量显著增高(P<0.01),而桂枝茯苓丸能够逆转oe-H19转染引起的lncRNA H19水平上升(1.14±0.12)(P<0.05)。oe-H19组[(240.00±15.89)%]细胞存活率较oe-NC组[(100.00±7.88)%]显著增高(P<0.05),转染oe-H19后的Ishikawa细胞经桂枝茯苓丸含药培养液处理后,其存活率明显降低(92.00±8.47)%(P<0.05)。oe-H19转染提高Ishikawa细胞P62表达,抑制Beclin1和LC3II表达,经桂枝茯苓丸含药培养液处理,Ishikawa细胞P62 Beclin1和LC3II表达部分恢复。结论桂枝茯苓丸具有抗子宫内膜癌活性,其作用机制可能是抑制lncRNA H19介导的miR-195-5p/SGK1通路,进而抑制子宫内膜癌细胞的增殖,促进细胞自噬。

• 单位
  浙江省宁波市中医院; 浙江中医药大学