TaqMan-MGB探针实时荧光定量-聚合酶链反应检测肺炎支原体方法的建立

作者：顾一心; 陶晓霞; 刘立雍; 张建中; 赵飞

来源：疾病监测, 2015, 30(03): 236-239.

• 肺炎支原体
• 实时荧光定量-聚合酶链反应
• Taq Man-MGB探针

目的建立敏感、特异的Taq Man-MGB探针实时荧光定量-聚合酶链反应(real-time PCR)快速检测方法,为临床标本中肺炎支原体快速检测提供技术支持。方法选取肺炎支原体重复序列Rep MP23中保守区域设计、合成特异性扩增引物和Taq Man-MGB探针,建立并优化real-time PCR检测方法。对优化后的方法使用标准浓度核酸进行扩增效率、灵敏度及特异度评价,并与已报道的肺炎支原体荧光PCR方法进行比较。结果本研究建立的Taq Man-MGB探针荧光PCR方法对肺炎支原体的检测限为0.2 cfu,比普通Taq Man real-time PCR检测限(35 cfu)提高了一个数量级。其检测标准曲线的循环阈值(Ct)与模板拷贝数呈良好的线性关系(R2=0.999)。用该方法扩增23种呼吸道常见病原菌染色体及人类染色体,结果均为阴性,特异度为100%。结论 Taq Man-MGB探针real-time PCR方法可快速、灵敏、特异地检测肺炎支原体,有很好的应用前景与价值。

• 单位
  传染病预防控制国家重点实验室; 中国疾病预防控制中心传染病预防控制所