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摘要
背景：在前期研究中发现骨髓血管内皮前体细胞在体外培养过程中通过旁分泌的方式产生了能够促进骨髓间充质干细胞分化的因子，血管内皮生长因子是其中之一。目的：探讨骨髓血管内皮前体细胞促进骨髓间充质干细胞向肝样细胞转化中是否有VEGF-Notch信号通路参与。方法：(1)分离培养SD大鼠骨髓间充质干细胞和骨髓血管内皮前体细胞，将第3代骨髓间充质干细胞分为3组：实验组使用培养骨髓血管内皮前体细胞的不含血清及因子的上清液，按照体积1∶1的比例与肝细胞转化培养基混合；模型对照组使用无血清的α-MEM培养基，按照体积1∶1比例与肝细胞转化培养基混合；空白对照组使用正常α-MEM培养基。在培养3,5,7,9 d，应用免疫荧光检测白蛋白、甲胎蛋白的表达。(2)取第3代骨髓间充质干细胞向肝样细胞转化分组培养，在肝细胞转化培养基中按体积1∶1比例分别加入培养骨髓血管内皮前体细胞的无血清及因子的上清液、血管内皮生长因子、培养血管内皮生长因子干扰质粒转染骨髓血管内皮前体细胞的无血清及因子的上清液；对照组使用肝细胞转化培养基培养。培养48 h后，使用实时定量RT-PCR和Western blot方法检测骨髓间充质干细胞中Notch下游基因Dll4、Hes1及Hey1的表达变化。结果与结论：(1)空白对照组骨髓间充质干细胞中未见白蛋白、甲胎蛋白的表达，实验组和模型对照组骨髓间充质干细胞中甲胎蛋白、白蛋白表达水平均增高(P <0.05)，其中实验组甲胎蛋白、白蛋白表达水平高于模型对照组(P <0.05);(2)肝细胞转化培养基中加入培养过骨髓血管内皮前体细胞的无血清及因子的上清液或血管内皮生长因子诱导骨髓间充质干细胞，Hey1、Dll4蛋白和mRNA表达均增高(P <0.05),Hes1蛋白和mRNA表达均降低(P <0.05)；而在肝细胞转化培养基中加入血管内皮生长因子干扰质粒转染骨髓血管内皮前体细胞的无血清及因子的上清液诱导骨髓间充质干细胞，Dll4、Hey1蛋白和mRNA的表达均降低，Hes1蛋白和mRNA表达均增高(P <0.05);(3)结果表明，骨髓血管内皮前体细胞在骨髓间充质干细胞向肝样细胞转化中可能起一定促进作用，在此过程中可能有VEGF-Notch信号通路参与。
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单位石河子大学医学院第一附属医院; 石河子大学
