非洲猪瘟病毒p30蛋白的原核表达及间接ELISA抗体检测方法的建立与应用

作者：张锦; 陈艳; 邹剑文; 周江飞; 龙云凤; 姜焱; 周斌^*

来源：畜牧与兽医, 2022, 54(03): 83-90.

• 非洲猪瘟病毒
• p30蛋白
• 间接ELISA
• 抗体检测

为建立非洲猪瘟病毒(ASFV)快速、高效和高通量的血清学诊断方法，本研究针对ASFV Pig/HLJ/2018毒株序列CP204L(p30)基因，构建了重组质粒pET-28a-p30,并通过原核表达系统获得ASFV重组p30蛋白，试验发现重组蛋白主要在包涵体中表达。经Western blot鉴定重组p30蛋白的反应原性良好。通过带有His标签的镍柱进行亲和层析，将纯化后的目的蛋白作为包被抗原，建立了ASFV抗体间接ELISA检测方法。此方法引入S/P值进行阴阳性判定，其临界值为0.8。特异性试验表明本方法能够特异性地检测ASFV抗体。本方法批内变异系数在1.10%～6.70%之间，批间变异系数在1.08%～9.55%之间，均小于10%。灵敏性试验表明检测限可以达到1∶1 024。将本研究建立的方法和商品化试剂盒进行了符合率的比较，结果显示，阳性符合率为98.91%(91/92),阴性符合率为98.75%(158/160),总体符合率为98.8%(249/252)。研究表明，本方法具有良好的特异性、灵敏性、重复性和符合率，表明其性能良好，具有较强的临床应用价值。