受体型酪氨酸激酶PDGFRβ在毕赤酵母中的表达与纯化

作者：茆建胜; 周祥山; 张元兴

来源：微生物学通报, 2009, (10): 1460-1465.

DOI：10.13344/j.microbiol.china.2009.10.001

• 受体酪氨酸激酶
• PDGFRβ
• 毕赤酵母
• 表达 Receptor tyrosine kinase
• Pichia pastoris
• Cloning
• Expression
• RTK activity

构建了受体酪氨酸激酶PDGFRβ的融合表达载体pPIC3.5K-PDGFRβ,转化毕赤酵母GS115,通过组氨酸营养缺陷型筛选,G4l8高拷贝菌株筛选,以及摇瓶诱导表达筛选,得到一株高表达PDGFRβ毕赤酵母菌株M3。对该菌株进行5L罐培养,镍柱亲和纯化在250mmol/L咪唑浓度下洗下PDGFRβ融合蛋白,Western blot验证约为90.08kD,酶联免疫反应检测表明融合表达的PDGFRβ具有高的酪氨酸激酶活性。为筛选其小分子抑制剂奠定了基础。