科研之友
微信
新浪微博
Facebook
分享链接
摘要
为诊断某规模化养猪场仔猪腹泻病原，并制备其特异性卵黄抗体，采用细菌分离培养、生化试验、16SrRNA PCR鉴定及系统进化树分析、药敏试验等方法对病料进行研究，并利用全菌体灭活和超声波破碎法制备抗原，将其分别与不同佐剂（ISA 71VG、ISA201VG和15AVG）配伍乳化制备疫苗免疫蛋鸡、聚乙二醇法提取高免卵黄抗体、SDS-PAGE电泳和Bradford法鉴定抗体质量及浓度、双向琼脂扩散试验测定抗体效价。结果表明，分离菌株的形状、大小及生化特性均与大肠杆菌相符。分离株的主要毒力基因E.coli-estb和elt基因分别为113、272 bp；分离株elt和estb基因与美国流行毒株如UMNK88处于同一分支，亲缘关系较近；与丹麦株CFSAN018748、瑞士株14OD0056处于不同分支，亲缘关系较远。分离菌株对头孢噻肟、诺氟沙星和复方新诺明敏感，对头孢曲松和多黏菌素B中介，对多西环素、呋喃唑酮以及多种氨基糖苷类和喹诺酮类抗菌药物耐药。各组卵黄抗体的重链（约70 ku）和轻链（约25 ku）均明显，纯度高。首免后56 d 0.2%甲醛处理的菌液与ISA 15AVG配伍所致疫苗的卵黄抗体蛋白含量最高（1.462mg/g卵黄），超声波破碎处理的菌液与ISA 71VG配合所制疫苗的卵黄抗体蛋白含量次之（1.459 mg/g卵黄）。血清抗体与菌体抗原反应性良好，超声波破碎抗原与ISA 71VG配伍所制疫苗的血清抗体、卵黄抗体效价分别高达1∶16、1∶4。
- 单位
