泉古菌Sulfolobus islandicus PCNA1的原核表达及其多克隆抗体的制备

作者：田斌; 张昌毅; 佘群新; 梁运祥

来源：华中农业大学学报, 2010, (01): 59-62.

DOI：10.13300/j.cnki.hnlkxb.2010.01.004

• 泉古菌
• PCNA1基因
• 原核表达
• 金属螯合亲和层析
• 多克隆抗体 Sulfolobus islandicus
• PCNA1 gene
• prokaryotic expression
• metal chelate affinity chromatography
• polyclonal antibody

泉古菌Sulfolobus islandicus中PCNA有3个同源类似蛋白,本研究选取PCNA1作为研究对象,为获得可溶性表达的PCNA1蛋白,制备多克隆抗体,深入了解PCNA1基因的功能,将PCNA1基因片段克隆到组氨酸标签融合的表达载体pET30a中,利用IPTG诱导,金属螯合亲和层析进行纯化分析表明,融合蛋白大部分可溶。紫外分光光度法测定纯化蛋白的纯度可达90%以上,浓度约为2 mg/mL。免疫家兔制备多克隆抗体,ELISA检测抗血清效价可达1∶10 000以上,Western印迹检测证明抗体特异性良好。

• 单位
  农业微生物学国家重点实验室; 华中农业大学; 生命科学技术学院