正交设计优化青蒿SRAP-PCR反应体系及引物筛选

作者：石紫薇; 梁妍; 姜婷婷; 梁剑平; 贾宁; 辛志君; 陆锡宏; 周翔; 李雪虎^*

来源：分子植物育种, 2020, 18(10): 3303-3310.

DOI：10.13271/j.mpb.018.003303

• 青蒿(Artemisia annua)
• SRAP标记
• 正交实验设计
• 体系优化
• 引物筛选

为了建立青蒿的SRAP最佳扩增体系,并筛选出SRAP多态性引物,本研究以青蒿叶片DNA为模板,采用正交试验设计,以Mg2+、dNTP Mix、Taq DNA聚合酶、引物和DNA模板5种因素5个水平,对青蒿SRAP反应体系进行研究。结果表明,青蒿SRAP-PCR最佳反应体系为:引物0.6μmol/L、Mg2+2.0 mmol/L、模板DNA 5.1 ng、Taq DNA聚合酶2.0 U、dNTPs 0.25 mmol/L,总体积为25μL。各因素对扩增反应均有不同影响,其中引物浓度的影响最大,dNTPs的影响最小。运用该体系对不同种质资源的青蒿进行验证,证明该体系稳定可靠,并在30个引物组合中筛选出了25对扩增条带清晰,多态性丰富的引物组合。这一结论为今后利用SRAP标记技术进行青蒿分子遗传学研究提供了科学依据。

• 单位
  中国科学院近代物理研究所; 甘肃农业大学; 兰州大学