一株永生化口腔癌相关成纤维细胞系的建立及鉴定

作者：陈盛; 杨艳; 丁亮; 叶传进; 张磊; 夏舒; 李慧玲; 黄晓峰^*

来源：中国组织工程研究, 2022, 26(24): 3808-3813.

• 肿瘤相关成纤维细胞
• 口腔鳞癌
• 原代细胞
• 永生化细胞系
• 细胞衰老
• 染色体核型鉴定

背景:肿瘤相关成纤维细胞系是构成肿瘤微环境的重要细胞成分,但是在原代培养过程中极易老化和表型丢失,进而显著降低肿瘤相关成纤维细胞功能相关研究的实验重复性。目的:旨在建立一种永生化的口腔癌相关成纤维细胞系,为探索口腔癌中肿瘤相关成纤维细胞功能提供稳定的细胞实验材料。方法:采用酶消化法分离、纯化人口腔癌组织来源肿瘤相关成纤维细胞,利用包装有人端粒酶反转录酶(pBABE-hygro-hTERT)的慢病毒感染原代肿瘤相关成纤维细胞,鉴定其形态及其标志物,然后进行细胞增殖、衰老功能检测,对原代和永生化肿瘤相关成纤维细胞进行染色体核型分析、细胞系身份鉴定。结果与结论:(1)成纤维细胞永生化后,其标志物α-SMA、PDGFRβ以及FSP-1表达没有发现显著改变;(2)即使在传代15代后,永生化成纤维细胞的增殖速率明显优于非永生化成纤维细胞;(3)β-半乳糖苷酶染色结果显示:随着细胞代数增加,与非永生化成纤维细胞相比,永生化成纤维细胞未见明显衰老;(4)永生化成纤维细胞染色体核型仍保留正常细胞的基本特征,而未发生恶性转化;(5)短串联重复序列鉴定结果显示,永生化成纤维细胞为原代细胞,与已知细胞数据库信息均无重合;(6)以上结果说明,成功建立了口腔癌来源的永生化成纤维细胞系,为口腔癌肿瘤微环境研究提供进一步的实验基础。

• 单位
  南京大学; 中心实验室