毛囊干细胞体外培养体系的建立

作者：全仁夫; 许世超; 曾林如; 倪月明

来源：浙江中西医结合杂志, 2014, 24(10): 853-944.

• 毛囊干细胞
• IV型胶原
• Q-PCR

目的建立一套可行的毛囊干细胞体外培养体系,获得高纯度的种子细胞,为构建新型人工皮肤积累实验数据。方法采用显微分离技术结合中性蛋白酶、四型胶原酶分离单个毛囊组织,分别接种于没有包被的24孔板(A组)、Matrigel基质胶包被的24孔板(B组)和成纤维细胞作为饲养层细胞的24孔板(C组),完全培养基培养细胞,然后采用IV型胶原差速贴壁法纯化毛囊干细胞,计算其黏附率,比较筛选前后细胞的增殖能力,并对其进行免疫荧光检测和Q-PCR检测与分析。结果通过显微切割技术结合中性蛋白酶和IV型胶原酶,分离单个毛囊组织,采用完全培养基Matrigel基质胶包被原代细胞培养,IV型胶原差速贴壁法分选纯化出的细胞,经过免疫荧光、细胞形态观察、Q-PCR检测,证实是毛囊干细胞,且增殖力强,可大量扩增。结论建立了一整套相对比较成熟的体外培养体系,为后期转染毛囊干细胞,构建复合人工皮肤,进行动物实验提供实验依据。

• 单位
  萧山中医院