鸭疫里默氏杆菌外膜蛋白A原核表达及间接ELISA方法的建立和初步应用

作者：陈汝佳; 李婷; 余波; 张亚楠; 蒲龄; 欧德渊; 徐景峨^*

来源：中国兽药杂志, 2022, 56(04): 9-16.

• 鸭疫里默氏杆菌
• 外膜蛋白A
• 原核表达
• ELISA

为建立鸭疫里默氏杆菌(Riemerella anatipestifer,RA)间接酶联免疫吸附试验(ELISA)方法，以RA贵州分离株RAG06基因组为模板扩增并克隆鸭疫里默氏杆菌OmpA基因，构建pET32a-OmpA重组原核表达质粒，转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞，重组菌经诱导、超声、纯化后，通过SDS-PAGE和Western blotting分析鉴定获得OmpA重组蛋白大小约57 KD;以OmpA重组蛋白为包被抗原初步建立ELISA方法并优化，经多次方阵检测结果显示，OmpA蛋白以2.243 mg/mL的浓度进行包被，血清以1∶100稀释，抗原包被条件为4℃过夜、封闭条件为37℃120 min、血清反应时间为37℃60 min、酶标抗体工作浓度为1∶1000、酶标抗体反应时间为37℃60 min、显色时间为15 min为最佳条件。确定临界值为0.389。特异性试验表明RA阳性血清有较好反应外，其他血清均无明显反应。批内变异系数2.77%～8.00%,批间变异系数为1.10%～7.80%。当阳性血清稀释比例为1∶1600时，仍可判断为阳性，敏感性较高。应用该方法检测贵州省120份鸭血清、65份鹅血清证明该方法能用于水禽源鸭疫里默氏杆菌的检测，应用该方法检测灭活疫苗免疫后的鸭血清和卵黄抗体，结果表明符合灭活疫苗消长规律。试验建立的ELISA方法，为RA的流行病学调查和RA抗体监测提供了血清学诊断方法。

• 单位
  贵州大学; 动物科学学院; 贵州省农科院