酵母双杂交技术筛选白细胞中HCV核心蛋白结合蛋白基因

作者：邵清成军白雪帆王琳**梁耀东刘敏李强

来源：世界华人消化杂志, 2004, (01): 92-94.

DOI：10.3969/j.issn.1009-3079.2004.01.022

• 核心蛋白
• 结合蛋白
• 酵母双杂交技术
• 丙型肝炎病毒
• 酵母表达载体
• 多聚酶链反应
• 生物信息学分析
• 开放读码框架
• 增菌
• 高尔基复合体

目的:用酵母双杂交技术筛选白细胞中与丙型肝炎病毒(HCV)核心蛋白结合蛋白的基因. 方法:用多聚酶链反应(PCR)法扩增HCV核心蛋白基因, 连接入酵母表达载体pGBKT-7中构建诱饵质粒,转化酵母细胞AH109并在其内表达,然后与转化了人白细胞文库质粒的酵母细胞Y187进行配合,在营养缺陷型培养基上进行双重筛选阳性菌落,增菌后提取质粒,转化入大肠杆菌,提取质粒并测序,进行生物信息学分析. 结果:成功克隆出核心蛋白基因并在酵母细胞中表达,配合后选出在四缺(SD/-Trp-Leu-Ade-His)培养基和铺有X- α-半乳糖(X-α-gal)的四缺培养基上均能生长并变成蓝色的真阳性菌落共6个,其...

• 单位
  中国人民解放军第四军医大学唐都医院; 中国人民解放军第302医院