非洲猪瘟病毒p54蛋白单克隆抗体的制备与鉴定

作者：郑丁丁; 逄文强; 王衡; 孙哲; 黄甜; 王彦伟; 郝丽影; 曹红梅; 李雪锋; 周莹; 白晨雨; 陈凌燕; 邓均华; 张桂红^*; 田克恭^*

来源：病毒学报, 2020, 36(06): 1143-1150.

DOI：10.13242/j.cnki.bingduxuebao.003812

• 非洲猪瘟病毒(ASFV)
• p54蛋白
• 单克隆抗体

2018年8月我国发现非洲猪瘟(African swine fever,ASF),并在多地蔓延,由于尚无疫苗和有效的治疗方法,病死率高达100%,给养猪业带来巨大的损失。目前控制该病,主要依靠快速、准确的诊断方法,尽早发现、处理,防止扩散。为制备特异性的非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)p54蛋白单克隆抗体,本研究利用大肠杆菌表达ASFV p54蛋白C端胞内区片段,构建能表达ASFV p54蛋白的工程菌E.coli BL21/pET-p54,经IPTG诱导表达可溶性的p54蛋白。用纯化后的可溶性蛋白免疫BALB/c小鼠,将免疫小鼠的脾细胞与骨髓瘤细胞融合,经4次筛选和3次亚克隆获得了21株分泌ASFV p54蛋白单克隆抗体的细胞株。通过ELISA测定腹水效价,结果均在1︰40 000～1︰5 120 000范围之内。以免疫组织化学染色法鉴定单克隆抗体,结果有9株可以特异性检出ASFV抗原。对免疫组化阳性的单克隆抗体进行亚类鉴定,结果 5株为IgG1,4株为IgG2a。以免疫印迹试验(Western Blot)和间接免疫荧光法(Indirect immunoinfluscent assay,IFA)鉴定单克隆抗体的特异性,结果显示,所有单克隆抗体均与p54蛋白和ASFV抗原反应,而不与表达载体及猪源其他常见病毒反应。本研究获得的单克隆抗体,将为ASFV的疫苗及诊断技术研究奠定基础。