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摘要
背景:天然骨形态发生蛋白2在体内无法实现缓释、持续诱导骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化,如何获得内源性骨形态发生蛋白2蛋白是目前研究的热点。目的:探讨腺病毒介导人骨形态发生蛋白2转染兔骨髓间充质干细胞的成骨分化能力及其可能机制。方法:采用腺病毒介导人骨形态发生蛋白2基因转染第3代兔骨髓间充质干细胞,转染后48 h采用qRT-PCR、Western blot检测骨髓间充质干细胞中骨形态发生蛋白2的mRNA和蛋白表达,利用Western blot检测Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白的表达水平。然后进行成骨诱导培养,第7天检测碱性磷酸酶活性,第14天采用免疫组织化学染色方法观察Ⅰ型胶原蛋白表达,第21天采用茜素红S染色观察钙结节形成情况。结果与结论:(1)Ad-BMP2-EGFP转染后骨髓间充质干细胞中骨形态发生蛋白2 mRNA和蛋白的表达明显上调;(2)Ad-BMP2-EGFP转染的骨髓间充质干细胞成骨诱导后碱性磷酸酶活性增强,Ⅰ型胶原蛋白分泌以及钙结节形成增多;β-catenin、cyclin D1、Runx2和c-myc蛋白表达上调,而GSK3β蛋白表达下调;(3)结果表明,Ad-BMP2-EGFP转染促进了骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化,其作用机制可能是通过上调骨形态发生蛋白2蛋白表达水平从而激活Wnt/β-catenin信号通路来实现的。
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