pcDNA3.1(+)/ChM-Ⅰ表达质粒的构建及鉴定

作者：周连仲; 刘冲; 苏玢; 王明辉^*

来源：医学理论与实践, 2022, 35(04): 544-547.

DOI：10.19381/j.issn.1001-7585.2022.04.002

• 软骨调节素Ⅰ
• pcDNA3.1(+)质粒
• 肿瘤治疗

目的：为了研究软骨调节素Ⅰ的生物学作用，构建pcDNA3.1(+)/ChM-Ⅰ表达质粒。方法：用Trizol法提取大鼠软骨组织总RNA,根据ChM-Ⅰ基因序列(序列号：AF051425)设计特异引物，通过PCR获取ChM-Ⅰ目的基因，分别将ChM-Ⅰ目的基因的PCR产物和pcDNA3.1 (+)质粒双酶切，并将两者定向连接，构建pcDNA3.1(+)/ChM-Ⅰ质粒，转化感受态细菌，挑取阳性单克隆并扩增，酶切鉴定阳性克隆，并对插入的ChM-Ⅰ片段进行测序。结果：结果显示与ChM-Ⅰ基因长度相符，序列无误，且读码框正确。结论：成功构建pcDNA3.1(+)/ChM-Ⅰ表达质粒，为进一步研究ChM-Ⅰ的生物学作用打下基础。

• 单位
  南开大学; 天津市第四中心医院