人支气管上皮细胞GCLC基因调控区ARE及E-box顺式调控元件调控功能的研究

作者：邹国明; 李冰; 冉丕鑫

来源：中华生物医学工程杂志, 2007, 13(03): 133-138.

DOI：10.3760/cma.j.issn.1674-1927.2007.03.003

• 基因转录调控
• 转录调控元件ARE
• 转录调控元件E-box
• 诱变

目的通过对人γ-谷氨酰半胱氨酸酶催化亚单位(GCLC)基因调控区的ARE及E-box顺式调控元件诱导缺失突变,研究它们在人支气管上皮细胞内对GCLC基因转录调控功能的影响。方法应用PCR方法克隆人GCLC基因调控区的大部分核苷酸序列,构建表达虫荧光素酶报告基因的野生型质粒PL45。采用PCR重叠延伸产生特异位点诱变的方法对ARE及E-box顺式调控元件进行缺失突变,构建相应的突变型质粒PLdel-ARE及PLdel-E-box。通过瞬时基因转染方法将上述质粒转染人支气管上皮细胞系16HBE,观察基因突变后的基因转录调控功能。结果质粒PL45的虫荧光素酶相对活性值为9949.75±1441.33、质粒PLdel-ARE的虫荧光素酶相对活性值为21258.75±1563.64、质粒PLdel-E-box的虫荧光素酶相对活性值为17082.00±89.51。与野生型质粒PL45相比,PLdel-ARE、PLdel-E-box突变型质粒表达的虫荧光酶相对活性值显著上升。结论ARE及E-box顺式调控元件具有负性调控作用。

• 单位
  广州医学院第一附属医院广州呼吸疾病研究所