包涵体蛋白LAP-F的制备、提取、纯化、验证

作者：刘增瑞; 宋旭东; 初彦辉^*

来源：牡丹江医学院学报, 2020, 41(02): 33-37.

DOI：10.13799/j.cnki.mdjyxyxb.2020.02.008

• 包涵体
• 复性
• 重折叠
• 纤维化

目的探究包涵体蛋白LAP-F制备、提取、纯化以及验证它对TGF-β诱导的HK-2细胞在形态学上的影响。方法通过高浓度尿素溶解包涵体,离心后将上清通过透析使蛋白复性,经镍琼脂糖亲和层析纯化重组蛋白,通过SDS-PAGE凝胶定量蛋白含量;将重组蛋白LAP-F作用于TGF-β诱导的HK-2细胞,并培养48h后通过显微镜观察细胞形态。结果诱导了LAP-F在包涵体的表达,并筛选出了高表达菌株。结论原核表达载体构建成功,成功筛选并纯化了目的蛋白;重组蛋白LAP-F可抑制TGF-β对HK-2细胞的纤维化,为后续研究LAP-F对TGF-β活化过程的干扰作用及对器官纤维化的影响奠定基础。

• 单位
  牡丹江医学院