基于PI3K/Akt信号途径探讨小金丹对巨噬细胞极化的调控作用及机制

作者：彭博; 练东银; 张广平; 陈颖; 侯红平; 贺蓉; 李建荣; 胡晓茹

来源：中国实验方剂学杂志, 2022, 1-10.

DOI：10.13422/j.cnki.syfjx.20220724

• 小金丹
• RAW264.7
• 巨噬细胞极化
• PI3K/Akt信号通路

目的：探讨小金丹提取物（Xiaojindan，XJD）对巨噬细胞极化的调控作用及作用机制。方法：以脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）、白细胞介素-4（interleukin-4，IL-4）刺激RAW264.7细胞诱导M1型和M2型极化。采用细胞计数试剂（CellCountingKit-8，CCK-8）法检测10-80mg·L~(-1)XJD对RAW264.7细胞增殖活性的影响；采用Griess法检测一氧化氮（nitricoxide，NO）的释放；采用酶联免疫吸附测定法（enzyme-linkedimmunosorbentassay，ELISA）检测细胞因子白细胞介素-6（interleukin-6，IL-6）释放；采用定量聚合酶链式反应（quantitativereal-timepolymerasechainreaction，qPCR）法检测M1型和M2型巨噬细胞标志物的基因表达；采用流式细胞分析法检测CD206表达；westernblot法检测磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B（PI3K/Akt）途径关键蛋白的活化。结果：10-80mg·L~(-1)XJD对0.5mg·L~(-1)LPS和20μg·L~(-1)IL-4诱导的RAW264.7细胞增殖未见明显影响。同空白组相比，LPS诱导组M1型巨噬细胞标志物表达升高，主要包括显著增加NO、IL-6的释放（P<0.01），明显上调M1型基因白细胞介素-1β（interleukin-1β，IL-1β）、一氧化氮合酶（induciblenitricoxidesynthase，iNOS）、前列腺素氧化环化酶-2（cyclooxygenase-2，COX-2）和肿瘤坏死因子-α（tumor necrosisfactor-α，TNF-α）mRNA的表达（P<0.01）。同LPS诱导组相比，20-80mg·L~(-1)XJD能剂量依赖性显著抑制NO、IL-6的释放（P<0.01）；10-80mg·L~(-1)XJD能剂量依赖性下调M1型基因IL-1β、iNOS、COX-2和TNF-αmRNA的表达（P<0.01）。同空白组相比，IL-4诱导组M2型巨噬细胞标志物表达升高，主要包括CD206~(+)巨噬细胞比例显著升高（P<0.01），明显上调M2型基因精氨酸-1（arginine-1，Arg-1）、白细胞介素-10（interleukin-10，IL-10）、白细胞介素-13（interleukin-13，IL-13）和转化生长因子-β1(transforminggrowthfactor-β_(1)，TGF-β_(1))mRNA的表达（P<0.01）。同IL-4诱导组相比，10-80mg·L~(-1)XJD能剂量依赖性显著降低CD206~(+)的M2型巨噬细胞比例（P<0.01）；明显下调Arg-1、IL-10、IL-13和TGF-β_(1)mRNA表达（P<0.01）。Westernblot实验显示，同空白组比较，LPS和IL-4诱导组磷脂酰肌醇3激酶p110（PI3K-p110）和磷酸化蛋白激酶B（p-Akt）表达均明显上调（P<0.01）；同LPS或IL-4诱导组比较，XJD能明显降低PI3Kp110蛋白表达和Akt磷酸化水平（P<0.05，P<0.01）。结论：小金丹提取物能抑制LPS和IL-4诱导RAW264.7细胞的M1型极化和M2型极化，机制与降低PI3K/Akt通路的活化水平有关。

• 单位
  中国食品药品检定研究院; 中国中医科学院中药研究所