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摘要
目的探讨微小RNA(microRNA)-4695-5p在结直肠癌患者血清中的表达及其对结直肠癌CACO-2细胞增殖与侵袭的影响。方法选取2018年3月—2021年11月郑州大学附属洛阳市中心医院胃肠外科收治的结直肠癌患者血清标本43例, 以43例门诊体检健康者的血清为对照。采用实时定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测结直肠癌患者血清和体检健康者血清中的相对表达量。将miR-4695-5p过表达质粒或阴性对照质粒转染CACO-2细胞, 即miR-4695-5p组和对照组, qRT-PCR验证转染效率。CCK8法及Transwell实验分别检测过表达miR-4695-5p对CACO-2细胞增殖及侵袭能力的影响。双荧光素酶报告基因实验验证miR-4695-5p与Ras相关的C3肉毒素底物1(RAC1)的靶向结合关系。qRT-PCR和Western blotting分别检测过表达miR-4695-5p对RAC1基因及Wnt/β-Catenin信号通路蛋白表达的影响。采用SPSS 28.0软件进行统计分析。正态分布的计量资料以均数±标准差(±s)表示, 组间比较采用t检验, 多组间比较采用方差分析。结果结直肠癌患者血清中miR-4695-5p表达水平明显低于体检健康者(P<0.01)。对照组和miR-4695-5p组中miR-4695-5p相对表达量分别为1.09±0.65和8.83±2.03, miR-4695-5p组CACO-2细胞中miR-4695-5p表达水平是对照组的8.10倍, 过表达miR-4695-5p的CACO-2细胞构建成功(P<0.01)。与对照组比较, miR-4695-5p组CACO-2细胞的增殖能力明显下降(P<0.05), CACO-2细胞的侵袭能力明显降低(P<0.01)。生物信息学工具和双荧光素酶报告基因实验证实miR-4695-5p能够与RAC1靶向结合(P<0.01)。与对照组相比, miR-4695-5p组RAC1基因表达明显下降(P<0.01), Wnt/β-Catenin信号通路蛋白Wnt3a、β-catenin、c-MYC表达显著下降。结论 miR-4695-5p在结直肠癌患者血清中呈低表达状态, miR-4695-5p通过靶向抑制RAC1基因表达下调Wnt/β-Catenin信号通路活性, 从而抑制结直肠癌CACO-2细胞的增殖与侵袭。
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