脂多糖诱导内源性高迁移率族蛋白B1分泌活化核因子-κB通路促进肺成纤维细胞异常增殖

作者：徐侨翌; 谢婷婷; 万晗曦; 胡晓婷; 何征宇; 皋源; 邢顺鹏^*

来源：国际麻醉学与复苏杂志, 2019, 40(04): 329-334.

DOI：10.3760/cma.j.issn.1673-4378.2019.04.009

• 脂多糖
• 肺成纤维细胞
• 高迁移率族蛋白B1
• 核因子-κB
• 细胞增殖

目的观察脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)刺激小鼠原代培养肺成纤维细胞后内源性高迁移率族蛋白B1(high mobility group box-1 protein, HMGB1)细胞内移位及细胞外分泌的情况, 并明确其在LPS诱导肺成纤维细胞异常增殖过程中的重要作用。方法①将原代培养的小鼠肺成纤维细胞采用随机数字表法分为2组(每组3个孔), 即PBS对照组(Con组)和LPS组(100 μg/L), Western blot检测LPS刺激12 h后HMGB1乙酰化修饰的情况, 同时采用免疫荧光检测HMGB1细胞内的定位情况。②将原代培养的小鼠肺成纤维细胞采用随机数字表法分为4组(每组3个孔), 即PBS对照组(Con组)、100 μg/L LPS组(LPS100组)、250 μg/L LPS组(LPS250组)和500 μg/L LPS(LPS500组), 于LPS刺激24 h后采用ELISA法检测上清液中HMGB1的含量。③采用随机数字表法将小鼠原代肺成纤维细胞分为4组(每组6个孔), NF-κB通路抑制剂吡咯烷二硫代甲酸铵(ammonium pyrrolidinedithiocarbamate, PDTC)预处理细胞30 min后再分别使用LPS、HMGB1刺激细胞0、12、24 h和48 h, 即PBS对照组(Con组)、LPS组(或HMGB1组)、PDTC组、LPS+PDTC组(或HMGB1+PDTC组), Cell Counting Kit-8(CCK-8)实验检测细胞增殖情况。结果①与Con组比较, LPS刺激细胞12 h后, LPS组乙酰化HMGB1/总HMGB1明显升高(P<0.05), 同时细胞质中HMGB1表达明显增加。② LPS刺激细胞24 h后, LPS各组上清液中HMGB1含量较Con组明显升高(P<0.05)。③ LPS刺激细胞24 h和48 h后, PDTC+LPS组细胞的光密度(D)值较LPS组明显降低(P<0.05);HMGB1刺激细胞12、24 h和48 h后, PDTC+HMGB1组D值较HMGB1组均明显降低(P<0.05)。结论 LPS可促进小鼠肺成纤维细胞核内HMGB1的主动分泌, 进而通过活化NF-κB信号通路加速细胞增殖, 可能是LPS诱导肺成纤维细胞异常增殖的重要机制。

• 单位
  上海交通大学医学院附属仁济医院