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摘要
猪(Sus scrofa)繁殖与呼吸障碍综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)是造成猪出现繁殖与呼吸障碍症状的主要病原之一,N蛋白作为该病毒主要的结构蛋白和抗原蛋白。为了研究美洲型猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒(NA-PRRSV)N蛋白的免疫原性,本研究以NAPRRSV QH-08毒株的RNA为模板,扩增获得372 bp的目的片段,扩增产物克隆入p ET30a(+)原核表达载体,构建p ET30a-NA-PRRSV-ORF7重组质粒,转入大肠杆菌(Escherichia coli)BL21(DE3);在37℃,以1mmol/L异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(isopropy-β-d-thiogalactoside,IPTG)诱导表达6 h;采用Ni-NTA树脂亲和层析纯化重组蛋白,并用不同浓度的尿素对纯化蛋白进行复性;复性后重组N蛋白作为免疫原,经背部多点免疫新西兰大耳白兔(Oryctolagus cuniculus),采用Western blot检测兔血清抗体特异性。十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE)分析表明,该ORF7编码基因在大肠杆菌中得到表达,蛋白大小约为24 k D;Western blot检测结果表明,该重组N蛋白与NA-PRRSV阳性猪血清发生特异性反应,与猪细小病毒1型(Porcine parvovirus type 1,PPV1)和PCV2猪血清不发生交叉反应,制备的NA-PRRSV兔抗血清与重组N蛋白发生特异性反应。该实验成功构建了NA-PRRSV-ORF7原核表达载体,实现了ORF7基因在大肠杆菌中的表达,纯化后的复性蛋白具有较好的免疫原性,为NA-PRRSV检测方法建立或试剂盒的开发提供了理论依据。
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单位家畜疫病病原生物学国家重点实验室; 甘肃农业大学; 中国农业科学院兰州兽医研究所
