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摘要
目的采用TA克隆的方法构建IGFBP7表达载体,考察IGFBP7过表达对SMMC7721细胞生存活力的影响。方法 RT-PCR法调取IGFBP7表达基因,构建p MD19-T Simple-IGFBP7载体,测序鉴定后与p IRES2-Zs Green1质粒进行拼接构建表达质粒;随后表达质粒转染SMMC7721细胞,RTFQ-PCR测定SMMC7721细胞中IGFBP7 m RNA水平,MTT检测IGFBP7表达质粒转染对SMMC7721细胞增殖的影响。结果 IGFBP7 c DNA设计长度为840 bp,电泳结果可在7501 000 bp观察到清晰单一条带,表明成功调取IGFBP7基因;p MD19-TS-IGFBP7载体和p IRES2-Zs Green1-IGFBP7表达质粒测序结果正确,表明表达质粒构建成功;RTFQ-PCR结果显示IGFBP7转染组细胞IGFBP7 m RNA水平显著升高;MTT结果显示IGFBP7转染组细胞增殖明显下降。结论成功用TA克隆的方法构建了IGFBP7表达载体,IGFBP7的过表达能显著抑制SMMC7721细胞增殖。
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