NADPH氧化酶4抑制剂对缺氧诱导的人RPE细胞中VEGF表达的抑制作用

作者：李静; 杨静; 康前雁^*

来源：中华实验眼科杂志, 2020, (01).

• 缺氧
• 视网膜色素上皮细胞,人
• 还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸氧化酶4
• 血管内皮生长因子
• 抑制剂

目的 观察还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸氧化酶4(NOX4)抑制剂对缺氧诱导的人视网膜色素上皮(RPE)细胞中血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响。方法 将APRE-19细胞分为Avastin干预组和VAS2870干预组,并按照药物剂量不同将Avastin干预组亚分为常氧对照组、缺氧对照组及0.25 mg/ml、0.50 mg/ml和0.75 mg/ml Avastin干预组,将VAS2870干预组亚分为1 μmol/ml、3 μmol/ml和5 μmol/ml VAS2870干预组,缺氧对照组采用终浓度为300 μmol/L CoCl2处理ARPE-19细胞以建立细胞化学缺氧模型。采用细胞免疫荧光染色技术对不同干预组细胞中NOX4和VEGF表达进行测定和定位,采用Western blot法对不同干预组细胞中NOX4和VEGF蛋白相对表达量进行测定和比较。结果 Western blot法检测显示,常氧对照组、缺氧对照组及0.25 mg/ml、0.50 mg/ml和0.75 mg/ml Avastin干预组NOX4蛋白相对表达量分别为0.657±0.153、1.000±0.200、1.206±0.300、1.260±0.200和1.413±0.273,VEGF-A蛋白相对表达量分别为0.821±0.110、1.210±0.100、0.672±0.100、0.340±0.120和0.300±0.130,组间总体比较差异均有统计学意义(F＝17.631,P<0.001；F＝4.777,P＝0.020),其中0.75 mg/ml Avastin干预组细胞中NOX4蛋白表达量明显高于常氧对照组,差异有统计学意义(P<0.001),0.25、0.50和0.75 mg/ml Avastin干预组VEGF-A表达量均明显低于缺氧对照组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。常氧对照组、缺氧对照组及1 μmol/ml、3 μmol/ml和5 μmol/ml VAS2870干预组细胞中NOX4的蛋白相对表达量分别为0.970＋0.120、1.060＋0.130、0.880＋0.130、0.567＋0.135和0.450＋0.120,VEGF-A蛋白相对表达量分别为0.387＋0.135、0.627＋0.125、0.370＋0.140、0.363＋0.140和0.160＋0.100,组间总体比较差异均有统计学意义(F＝12.933,P<0.001；F＝4.948,P<0.05),其中3 μmol/ml和5 μmol/ml VAS2870干预组细胞中NOX4蛋白相对表达量明显低于缺氧对照组,差异均有统计学意义(均P<0.001)；1 μmol/ml、3 μmol/ml和5 μmol/ml VAS2870干预组细胞中VEGF-A蛋白相对表达量明显低于缺氧对照组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论 NOX4抑制剂可抑制人RPE细胞中VEGF-A表达。

• 单位
  西安交通大学第一附属医院; 陕西省人民医院