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摘要
目的 探究粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)基因修饰的穿梭质粒能否对BALB/c小鼠结肠癌有疗效。方法 构建表达鼠粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(mGM-CSF)的穿梭质粒。实验分为pT7 mGM-CSF组(质粒组)、空载体对照组(pT7 GFP组)和溶剂对照组(PBS组)。Elisa检测pT7 mGM-CSF体外转染真核细胞后的表达量；选取雌性BALB/c小鼠，用表达近红外荧光蛋白(IRFP)的鼠结肠癌细胞株(CT26-IRFP)皮下植瘤；采用瘤内注射方式给药，游标卡尺测量实验组BALB/c小鼠肿瘤生长的情况；用小动物活体成像仪观察BALB/c小鼠体内肿瘤IRFP荧光强度表达情况并记录存活率；IHC法检测瘤组织内免疫细胞浸润情况。结果 与pT7 GFP组和PBS组比较，质粒组的表达在转染pT7 mGM-CSF质粒的293T细胞上清中的含量达到600pg/mL;和溶剂PBS组相比，质粒组与pT7 GFP组动物肿瘤生长趋势更为平缓，给药第21d,与PBS组比较，质粒组治疗效果明显；在治疗28d后质粒组小鼠存活率为40%,与pT7 GFP和PBS组相比有显著性差异；携带mGM-CSF基因的穿梭质粒组IRFP基因表达的荧光信号与pT7 GFP组和PBS组相比有显著性差异(P<0.05);IHC检测结果显示质粒组瘤组织内有大量的T淋巴细胞、NK细胞浸润聚集。结论 mGM-CSF基因修饰的穿梭质粒对鼠结肠癌具有明显的抑瘤效应，可能与质粒pT7 mGM-CSF有效刺激免疫细胞浸润有关。
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