HSV-IgM人-鼠嵌合抗体制备及稳定细胞株构建工艺开发

作者：崔亚敏; 田晓平; 孙静静; 王志强; 赵巧辉^*; 李桂林

来源：生物工程学报, 2023, 39(09): 3887-3898.

DOI：10.13345/j.cjb.220912

• 人鼠嵌合IgM抗体
• CHO-S细胞
• 构建工艺
• 表达

为实现体外大规模制备单纯疱疹病毒HSV-IgM (HSV1, HSV2)人鼠嵌合抗体，本研究通过RNA连接酶介导的cDNA末端快速扩增(RNAligase-mediatedrapidamplificationofcDNAends,RLM-RACE)技术获取其对应杂交瘤细胞基因序列，构建嵌合抗体至真核表达载体，在CHO-S细胞中稳定表达所需目的蛋白。同时优化稳定细胞株筛选工艺，对细胞池构建阶段和单克隆筛选阶段的加压条件进行摸索与探究，最后目的抗体采用蛋白L亲和纯化法进行纯化并进行生物活性检测；最终成功制备899 kDa和909 kDa的稳定高表达重组IgM抗体(HSV1, HSV2)细胞株。结果表明，最适筛选压力为20P200M(一轮加压)和50P1000M(二轮加压)；使用加压培养基进行单克隆筛选抗体表达量较高，HSV1-IgM和HSV2-IgM单克隆最终表达量分别为1620mg/L和623mg/L。本研究为HSV1和HSV2的IgM系列重组抗体质控品开发以及体外高表达分泌IgM亚型抗体提供理论与实践基础。