腾冲嗜热厌氧菌新型变旋酶的表达、纯化及晶体分析

作者：武岚; 钱忠; 付俊; 缪时英; 王琳芳

来源：中国医学科学院学报, 2009, (06): 696-701.

• 腾冲菌
• TTE1925
• 半乳糖变旋酶
• 原核表达
• 蛋白质纯化
• 结晶 Thermoanaerobacter tengcongensis
• galactose mutarotase
• prokaryotic expression
• protein purification
• crystallization

目的纯化腾冲嗜热厌氧菌新型变旋酶TTE1925,用于晶体生长和三维结构分析。方法将tte1925基因克隆至原核表达载体pGEX-6P-1中,将菌落PCR和测序鉴定正确的重组质粒转化E.coliBL21(DE 3)后获得表达菌株。该菌株经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷诱导高效表达出带有谷胱甘肽S转移酶标签的可溶性融合蛋白,经过GlutathioneSepharoseTM4B亲和层析、Resource Q 6 mL离子交换层析和10/300 superdex 200分子筛层析纯化后,得到目的蛋白TTE1925。结果纯化后蛋白的纯度达到99%以上。蛋白采用悬滴气相扩散法得到衍射至1.9的棒状晶体。结论...

• 单位
  中国科学院北京基因组研究所; 医学分子生物学国家重点实验室; 中国医学科学院北京协和医学院