骨髓间充质干细胞可减轻脂多糖所致肾损伤大鼠的细胞焦亡

作者：尹云玉; 刘奎; 汤露; 丁雪峰; 王大庆; 陈丽^*

来源：中华危重病急救医学, 2022, 34(03): 284-288.

• 骨髓间充质干细胞
• 脂多糖
• 肾损伤
• 焦亡

目的探讨骨髓间充质干细胞(BMSC)移植对肾损伤大鼠体内细胞焦亡的影响及其机制。方法体外分离培养4～5周龄清洁级雌性SD大鼠的BMSC, 取第3代细胞用于后续实验。采用成组设计, 随机将15只6周龄清洁级雌性SD大鼠分为对照组、肾损伤模型组和BMSC组, 每组5只。采用经尾静脉注射脂多糖(LPS)1 mg/kg构建肾损伤模型;对照组以相同途径给予等量生理盐水。BMSC组于制模后2 h经尾静脉注射BMSC 0.5 mL(含BMSC 2×106个);肾损伤模型组和对照组给予等量生理盐水。于术后3 d取各组大鼠腹主动脉血, 采用苦味酸法检测血肌酐(SCr)水平, 采用二乙酰一肟法检测血尿素氮(BUN)水平, 采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血胱抑素C(Cys C)和白细胞介素(IL-1β、IL-18)水平。处死大鼠取肾组织, 采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测大鼠肾组织NOD样受体蛋白3(NLRP3)、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶1(caspase-1)的mRNA表达;采用蛋白质免疫印迹试验(Western blotting)检测大鼠肾组织NLRP3、caspase-1的蛋白表达。结果体外培养显示, 骨髓细胞悬液培养24 h后出现大量圆形贴壁细胞和悬浮细胞, 培养4～5 d后有大量长梭形细胞聚集性贴壁生长, 仍可见明显的杂质细胞, 经胰酶消化并传代至第3代以长梭形贴壁细胞为主, 基本纯化为BMSC。体内实验显示, 与对照组比较, 肾损伤模型组大鼠SCr、BUN、Cys C、IL-1β、IL-18水平均明显升高〔SCr(μmol/L):85.22±2.29比21.80±0.59, BUN(mmol/L):11.50±0.64比5.86±0.83, Cys C(mg/L):0.13±0.01比0.11±0.02, IL-1β(ng/L):31.49±1.42比4.74±0.49, IL-18(ng/L):29.01±1.95比1.52±0.03, 均P<0.05〕, NLRP3及caspase-1的mRNA和蛋白表达水平也均明显升高〔NLRP3 mRNA(2-ΔΔCt):3.635±0.296比1.000±0.002, caspase-1 mRNA(2-ΔΔCt):4.020±0.228比1.001±0.003;NLRP3蛋白(NLRP3/β-actin):1.560±0.868比0.902±0.036, caspase-1蛋白(caspase-1/β-actin):1.392±0.097比0.895±0.046, 均P<0.05〕。与肾损伤模型组比较, BMSC组大鼠SCr、BUN、IL-1β、IL-18水平均明显下降〔SCr(μmol/L):51.64±3.84比85.22±2.29, BUN(mmol/L):9.90±0.46比11.50±0.64, IL-1β(ng/L):24.20±1.45比31.49±1.42, IL-18(ng/L):12.97±1.25比29.01±1.95, 均P<0.05〕, NLRP3及caspase-1的mRNA和蛋白表达水平也均明显下降〔NLRP3 mRNA(2-ΔΔCt):1.488±0.136比3.635±0.296, caspase-1 mRNA(2-ΔΔCt):1.643±0.143比4.020±0.228;NLRP3蛋白(NLRP3/β-actin):1.227±0.053比1.560±0.868, caspase-1蛋白(caspase-1/β-actin):1.159±0.107比1.392±0.097, 均P<0.05〕。结论在体内, BMSC可以减轻LPS所致肾损伤大鼠的细胞焦亡。

• 单位
  川北医学院附属医院