白细胞介素7剪接变异体蛋白的表达、复性和纯化

作者：严思; 陈鉴华; 李小波; 金小宝; 朱家勇; 潘德顺

来源：解剖学研究, 2016, 38(03): 174-181.

• 白细胞介素7剪接变异体
• 表达
• 复性
• 纯化

目的表达、复性和纯化重组人白细胞介素7剪接变异体蛋白(interleukin-7 splice variants,IL-7splice variants),为下一步功能研究奠定基础。方法在IL-7剪接变异体(IL-7δ4/5以及IL-7δ3/4)cDNA克隆的基础上进行亚克隆,插入细菌表达载体pET-21b中,构建相应的原核表达载体,阳性克隆测序,证实其构建成功,转化入大肠杆菌BL21(DE3)中,对各蛋白表达条件进行优化、复性及纯化,利用Western blot鉴定重组蛋白。结果各表达蛋白与预期相对分子质量(10.3 ku、9.3 ku)相符,纯化后蛋白纯度高达95%以上,并经免疫印迹鉴定证实表达的蛋白为IL-7δ4/5和IL-7δ3/4。结论成功获得高纯度的IL-7剪接变异体复性蛋白。

• 单位
  广东药科大学