广东汉族妊娠期糖尿病妇女胎盘组织microRNA差异表达谱分析

作者：李伟; 胡宝春; 龚照

来源：南京医科大学学报(自然科学版), 2017, 37(03): 298-302.

• 妊娠期糖尿病
• miRNA
• 差异表达谱
• 高通量测序

目的 :探索妊娠期糖尿病(gestational diabetes mellitus,GDM)与正常妊娠胎盘组织微小RNA(microRNA,miRNA)的差异表达,为深入研究GDM发病机制提供基础。方法:选取于2013年1月—2014年1月在武警广东省总队医院、南方医科大学珠江医院就诊并分娩的GDM孕妇20例作为观察组(GDM组),均为粤籍汉族并且相互之间无亲缘关系,随机选取同期无妊娠合并症的正常广东汉族孕妇20例作为对照组。胎儿分娩后收集胎盘组织,用TRIzol法进行总RNA提取,经过质量和纯度分析鉴定合格后分别选取5个样本混合成GDM和对照组,采用逆转录法构建小RNA文库,使用第二代高通量测序采用边合成边测序的方法对miRNA进行测序并分析结果。结果:从胎盘组织提取到的总RNA纯度较高,D(260 nm)/D(280 nm)>1.90,并成功构建小RNA的c DNA文库。采用高通量测序得到长度为1035 nt的小RNA片段,其中文库数量最多的小RNA长度2124 nt,miRNA量占所有小RNA总量的30%以上,最终获得洁净的片段超过10 000 000。将得到的片段与Genebank及Rfram数据库比对,去除其他小RNA筛选出miRNA达7 000多种。通过样本两两比较分析,与对照组相比,发现GDM组有138种已知的miRNA表达明显上调,包括hsa-miR-548au-5p、hsa-miR-95a-5p、hsa-miR-373-5p、hsa-miR-216-5p等(log2-ratio>1,P<0.01);16种已知miRNAs明显表达下调,如hsa-miR-5699-5p、hsa-miR-4286等(log2-ratio<-1,P<0.01)。Mireap软件预测出27种新miRNA,其中有9种在GDM表达升高,6种表达降低。结论:GDM的胎盘组织miRNAs与对照组存在表达差异,胎盘组织miRNA可能在GDM发病过程中起一定的调节作用。

• 单位
  武警广东省总队医院