无血清悬浮培养MDCK细胞系的建立及生物反应器高密度培养

作者：赵彩红; 王美皓; 李自良; 靳冬武; 马花; 马忠仁; 乔自林; 陈宏; 张家友; 王家敏^*

来源：中国生物制品学杂志, 2021, 34(11): 1362-1369.

DOI：10.13200/j.cnki.cjb.003482

• MDCK悬浮细胞
• 流感病毒
• 高密度增殖
• 放大培养

目的建立无血清悬浮培养MDCK细胞系,分析该悬浮细胞的生长特性、病毒敏感性、代谢动力学特征及生物反应器线性放大的可行性。方法通过逐步降血清和无血清悬浮驯化的方式获得1株MDCK悬浮细胞,检测其病毒敏感性,在1.2 L四联平行生物反应器中分析该悬浮细胞以不同初始接种密度(50×104、100×104、150×104、200×104个/mL)培养的细胞生长特性、代谢动力学特征和最佳传代时间,并进行5 L到75 L生物反应器的线性放大培养。结果贴壁培养型MDCK细胞以3%低血清稳定培养5代后,将该细胞直接适应无血清培养基获得1株MDCK悬浮细胞(命名为MDCK-XF03)并建库,复苏活力为96.8%;细胞接种不同型别的流感病毒均能较好增殖;以不同初始接种密度培养MDCK-XF03细胞,其最大增殖浓度均达1 000×104个/mL以上,且差异无统计学意义(P> 0.05),在培养前48 h均具有较大比生长速率,且差异有统计学意义(P <0.05),此时倍增时间也较短,且差异有统计学意义(P <0.05),MDCK-XF03细胞在84 h之前可充分利用葡萄糖。结论成功获得1株MDCK悬浮细胞MDCK-XF03,选择以200×104个/mL的初始接种密度进行生物反应器大规模培养,实现了从5 L到75 L的高密度线性放大培养,为流感疫苗的工业化生产提供了细胞基质。

• 单位
  武汉生物制品研究所有限责任公司; 西北民族大学; 兰州百灵生物技术有限公司