热休克蛋白5调控内质网应激在视网膜色素上皮细胞保护中的作用

作者：冯竞仰; 陆冰; 朱鸿; 孙向军; 孙晓东^*

来源：眼科新进展, 2019, 39(12): 1111-1115.

DOI：10.13389/j.cnki.rao.2019.0255

• 视网膜色素上皮细胞
• 脂褐素
• 内质网应激
• 热休克蛋白5
• 年龄相关性黄斑变性

目的探讨相对分子质量70 000的热休克蛋白5(heat shock 70 kDa protein 5,HSPA5)调控内质网应激在N-亚视黄基-N-视黄基乙醇胺(N-retinylidene-N-retinylethanolamine,A2E)联合蓝光诱导视网膜色素上皮(retinal pigment epithelium,RPE)细胞损伤对RPE细胞的保护作用。方法建立A2E联合蓝光诱导RPE细胞损伤模型,显微镜下观察RPE细胞对A2E的摄取。在RPE细胞损伤后3 h、6 h、12 h、24 h和48 h,运用CCK-8法检测RPE细胞活力;Western blot检测RPE细胞内质网应激相关蛋白HSPA5和CHOP的表达情况。构建HSPA5 shRNA慢病毒载体抑制RPE细胞中HSPA5的表达,实验分3组,HSPA5干扰组转染了HSPA5干扰序列,阴性干扰组转染了阴性对照序列,野生型组为未转染的RPE细胞。检测在RPE细胞损伤时,干扰HSPA5对内质网应激相关凋亡分子CHOP、Caspase-12表达以及RPE细胞活力的影响。结果细胞活力检测结果显示,A2E联合蓝光照射后3 h、6 h、12 h、24 h和48 h,RPE细胞活力分别是对照组的(80.9±6.2)%、(73.3±5.8)%、(70.6±5.4)%、(62.3±6.1)%和(51.4±4.5)%,与对照组相比差异均有统计学意义(均为P<0.05)。Western blot检测结果显示,HSPA5和CHOP蛋白表达在RPE细胞损伤后均有不同程度增高(P<0.05)。在A2E联合蓝光处理后12 h,HSPA5干扰组的CHOP和Caspase-12蛋白表达较对照组显著升高,并且RPE细胞活力明显下降(均为P<0.05)。结论 A2E联合蓝光可诱导RPE细胞发生损伤,损伤机制与内质网应激相关。HSPA5具有调控内质网应激,减轻A2E及蓝光损伤,促进RPE细胞存活的作用。

• 单位
  上海交通大学